应用固相萃取技术时的注意事项

应用固相萃取技术时的注意事项

常规流程：活化→平衡→上样→淋洗→洗脱；核心风险点：填料干涸、流速过快、pH 不合适、过载、溶剂选错

1、小柱活化与平衡

1. 硅胶基填料（C18、C8、硅胶、离子交换）活化后、上样前严禁填料床干涸，一旦干床，键合相塌陷，保留能力大幅下降、回收率不稳定；HLB 等聚合物小柱耐干，但也不建议刻意风干Thermo Fis...

2. 反相 C18：一般先用甲醇 / 乙腈活化，再用样品基质溶剂（水 / 缓冲液）平衡；活化溶剂要充分浸润填料，排出气泡

3. 离子交换小柱：活化、平衡必须同步控制 pH，保证目标物、填料处于预期带电状态Thermo Fis...

4. 溶剂液面：每一步结束前保留少量溶剂在筛板上方，不要流干

2、上样环节

1. 控制流速：常规推荐 1～3 mL/min；流速太快，目标物来不及吸附，发生穿透（穿流）；流速太慢效率低、重现性变差Thermo Fis...

2. 防止过载：总保留物（目标物 + 基质杂质）不能超过填料吸附容量；反相一般建议负载量≤填料质量 1%~5%，过载直接穿透、回收率下降

3. 上样溶剂强度不能太强：反相模式上样液有机相比例不宜过高；否则目标物不容易挂柱，直接随流出液跑掉

4. pH 匹配（离子交换 / 弱酸弱碱化合物重点）

• 酸性物质：pH ＜ pKa-2，呈分子态（反相保留）；离子交换则调至解离带电

• 碱性物质：pH ＞ pKa+2，呈分子态（反相保留）Thermo Fis...

5. 浑浊样品必须预先过滤 / 离心，悬浮物会堵塞筛板、填料，柱压飙升、流路不均

3、淋洗步骤

1. 淋洗溶剂强度要适中：能洗掉杂质，但不能把目标物提前洗脱下来；优先用低有机相、合适 pH 的水溶液 / 缓冲盐

2. 淋洗体积不要盲目加大，体积过大也会造成目标物流失

3. 盐浓度、pH 要和上样体系保持连续，避免突变导致目标物解离

4、洗脱步骤

1. 洗脱溶剂要有足够洗脱强度，可分次小体积洗脱（比如 2×3 mL，比一次性 6 mL 效果更好）

2. 洗脱流速宜慢，保证溶剂和填料充分作用；收集洗脱液时注意不要洒漏

3. 洗脱溶剂要和后续检测匹配：GC 不能含水、HPLC/MS 避免难挥发盐

5、干燥除水

• 淋洗之后、洗脱之前：除水很重要，水分会稀释洗脱溶剂、降低洗脱能力；可低压抽干（不要猛抽长时间干床）

• 注意：部分极性目标物长时间真空干吹会吸附损失

6、系统与耗材

1. 管路、接头、收集管尽量选用低吸附材质；部分脂溶性、易吸附物质会吸附在塑料管壁造成损失

2. 真空固相萃取装置：真空度稳定，避免忽大忽小；多通道要保证每个小柱流速均匀

3. 批次对照：做基质空白、溶剂空白、加标回收，判断是损失、污染还是基质干扰

7、安全与污染控制

1. 有机溶剂操作在通风橱，做好防护；甲醇、乙腈、二氯甲烷等挥发性溶剂注意防爆防毒

2. 交叉污染：不同样品、不同浓度之间，管路、收集管及时更换或充分清洗

3. 溶剂现配现用，缓冲液注意抑菌、pH 随时间漂移

8、快速故障判断

• 上样流出液检出目标物：过载、溶剂太强、流速太快、pH 不对

• 淋洗液检出目标物：淋洗溶剂太强

• 洗脱液回收率低：洗脱溶剂偏弱、体积不足、填料干涸、目标物不可逆吸附